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《分子克隆技术》实验内容

序号

实验名称

实验内容

学时

实验性质

主要设备

1

植物DNA片段在质粒载体中的克隆

(25学时)

目的:掌握利用质粒载体克隆外源基因的原理、方法。

内容:

  1. 质粒载体及外源DNA的提取及质量检测
  2. 质粒DNA及外源DNA的限制性内切酶消化、酶切结果检测
  3. 酶切产物纯化、回收及连接

4. 感受态细胞的制备及连接子的转化、鉴定

 

 

 

 

6

 

 

4

6

 

9

综合

必修

 

普通离心机,低温离心机,普通水浴锅,低温水浴锅,超净工作台,微波炉,培养箱,摇床,移液器,电泳仪,电泳设备,紫外透射仪等,

2

RT-PCR

(12学时)

目的:掌握RNA抽提、反转录、PCR的原理及方法,了解RNA操作的注意事项。

内容:

  1. 植物RNA的抽提及质量检测
  2. RT-PCR

 

 

 

 

 

 

6

6

综合

必修

 

水浴锅,低温离心机,冰箱,电泳设备,PCR仪紫外透射仪等

3

分子杂交技术(23学时)

 

目的:掌握Southern Blotting的原理及方法

具体内容:

  1. 植物基因组DNA的快速抽提
  2. 植物总DNA的质量检测及限制性内切酶酶切
  3. 酶切效果检测及琼脂糖凝胶电泳
  4. 探针标记及标记效率检测
  5. 转膜及固定,
  6. 预杂交,杂交
  7. 洗膜及显色

 

 

 

 

3

 

3

 

2

 

4

5

2

4

 

综合

必修

 

恒温箱,

电泳设备,

水浴锅,

杂交炉,

干浴等

 

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